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更新時(shí)間:2024-11-04
相對(duì)定量分析方法 :
2-ΔΔCt
染料法熒光定量PCR試劑盒前提:目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100%且偏差在5%以內(nèi)
1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值:
ΔCT(test)= CT(target,test)-CT(ref,test)
ΔCT(calibrator)= CT(target,calibrator)-CT(ref, calibrator)
2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗(yàn)樣本的ΔCT值:
ΔΔCT= ΔCT(test) - ΔCT(calibrator)
3、計(jì)算表達(dá)水平比率:
2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值
使用方法:
一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
具有下列特點(diǎn):
1.根據(jù) 指標(biāo)的保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
2.靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個(gè)數(shù)量級(jí),可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
3.即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測(cè),避免后續(xù)污染。
5.本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6.本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器(2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
Inhibin alpha antibody [EPY2782]原裝、分裝型肝炎核心抗原(HBV)(18-27)
Inhibin alpha antibody [EPY2782]原裝、分裝型肝炎病毒核心(107-115)
SRPRB antibody原裝、分裝型肝炎病毒核心,(型肝炎抗原31)
TMEM35 antibody原裝、分裝型肝炎病毒核心蛋白(128-140)
PIEZO2 antibody原裝、分裝型肝炎病毒膜蛋白(183-191)
tenomodulin antibody原裝、分裝型肝炎病毒膜蛋白(335-343)
JAM-C antibody原裝、分裝型肝炎病毒聚合酶(455-463)
Human SLC5A4 peptide原裝、分裝型肝炎病毒聚合酶(502-510)
IRHOM1 antibody原裝、分裝型肝炎病毒聚合酶(655-663)TIMP1 antibody [EP1549RY]原裝、分裝胃泌素釋放肽,人
AKT1 (phospho S473) antibody [EP2109Y]原裝、分裝胃泌素釋放肽,豬
AKT1 (phospho S473) antibody [EP2109Y]原裝、分裝胃泌素釋放肽-Lys(生物素),人
AKT1 (phospho S473) antibody [EP2109Y]原裝、分裝胃泌素釋放肽(1-6),人
Phospholipase C gamma 1/PLC-gamma-1 (phospho Y1253) antibody [EP1502Y]原裝、分裝胃泌素四肽
Phospholipase C gamma 1/PLC-gamma-1 (phospho Y1253) antibody [EP1502Y]原裝、分裝胃饑餓素,人
Phospholipase C gamma 1/PLC-gamma-1 (phospho Y1253) antibody [EP1502Y]原裝、分裝胃饑餓素,大鼠
MMP26 antibody [EP1283Y]原裝、分裝生長(zhǎng)激素釋放子,小鼠
MMP26 antibody [EP1283Y]原裝、分裝生長(zhǎng)激素釋放子,綿羊
染料法熒光定量PCR試劑盒基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B檢測(cè)試盒20mg
基質(zhì)金屬蛋白酶抑制子2檢測(cè)試盒20mg
基質(zhì)金屬蛋白酶抑制子3檢測(cè)試盒20mg
基質(zhì)金屬蛋白酶抑制子4檢測(cè)試盒20mg
基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制子1檢測(cè)試盒5mg
基質(zhì)裂解蛋白/基質(zhì)溶素檢測(cè)試盒50mg
基質(zhì)細(xì)胞衍生子1a檢測(cè)試盒20mg
基質(zhì)細(xì)胞衍生子1β檢測(cè)試盒100mg
激動(dòng)異構(gòu)酶/細(xì)胞分裂素MB檢測(cè)試盒0.2ml
注意事項(xiàng):
1. 建議使用新鮮采取的動(dòng)物組織,若為長(zhǎng)期冷凍組織,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,否則會(huì)導(dǎo)致模板的降解,影響PCR效率。
2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時(shí)間,也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
3. 電泳檢測(cè)時(shí),切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時(shí)會(huì)在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
4. 建議擴(kuò)增片段長(zhǎng)度1 kb以內(nèi),以便擴(kuò)增效率佳。
?5. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。